熒光顯微鏡與普通光學(xué)顯微鏡不同，它不是通過普通光源的照明觀察標本，而是利用一定波長的光激發(fā)顯微鏡下標本內(nèi)的熒光物質(zhì)，使之發(fā)射熒光。所以，熒光顯微鏡的光源所起的作用不是直接照明，而是作為一種激發(fā)標本的內(nèi)熒光物質(zhì)的能源。我們之所以能觀察標本，是由于光源的照明，而是標本內(nèi)熒光物質(zhì)吸收激發(fā)的光能后所呈現(xiàn)的熒光現(xiàn)象。

　　由此可知，熒光顯微鏡的特點，主要是它的光源能供給大量特定波長范圍的激發(fā)光，使受檢標本內(nèi)的熒光物質(zhì)能獲得必要強度的激發(fā)光。同時，熒光顯微鏡必須具備相應(yīng)的濾光鏡系統(tǒng)。

　　熒光顯微鏡激發(fā)熒光的方式：

　　按光的波長范圍分為UV激發(fā)法(使用紫外線照明法)和BV激發(fā)法(使用藍紫光)兩種。UV激發(fā)法是用短于400nm的近紫外光進行激發(fā)。該法不存在可見的激發(fā)光，所以被觀察的熒光呈現(xiàn)該染料固有的熒光，容易判別標本上的特異熒光和背景組織的自身熒光。

　　BV激發(fā)法是以404nm、434nm為中心的由紫外至藍光進行激發(fā)。該方法使用藍光照射標本，所以熒光觀察系統(tǒng)的截止濾光片必須使用可*阻斷藍光并可充分通過所需綠、黃熒光的濾光片，用于熒光抗體法的熒光色素。

　　使用熒光顯微鏡的注意事項

　　1.防止紫外線對眼睛的損害，在調(diào)整光源時應(yīng)戴上防護眼鏡。

　　2.應(yīng)在暗室中進行檢查。進入暗室后，接上電源，點燃超高壓汞燈5～15min，待光源發(fā)出強光穩(wěn)定后，眼睛*適應(yīng)暗室，再開始觀察標本。

　　3.標本染色后立即觀察，因時間久了熒光會逐漸減弱。若將標本放在聚乙烯塑料袋中4℃保存，可延緩熒光減弱時間，防止封裱劑蒸發(fā)。

　　4.熒光亮度的判斷標準：一般分為四級，即“一”—無或可見微弱熒光。“+”—僅能見明確可見的熒光。“++”—可見有明亮的熒光。“+++”—可見耀眼的熒光。

　　5.檢查時間每次以1～2h為宜，超過90min，超高壓汞燈發(fā)光強度逐漸下降，熒光減弱;標本受紫外線照射3～5min后，熒光也明顯減弱;所以，zui多不得超過2～3h。

　　6.熒光顯微鏡光源壽命有限，標本應(yīng)集中檢查，以節(jié)省時間，保護光源。天熱時，應(yīng)加電扇散熱降溫，新?lián)Q燈泡應(yīng)從開始就記錄使用時間。燈熄滅后欲再用時，須待燈泡充分冷卻后才能點燃。一天中應(yīng)避免數(shù)次點燃光源。